Extracción de ADN


Conocimientos previos Célula División celular ADN Introducción  Es un método por el cual se obtiene el ADN a partir de las…

Conocimientos previos

Célula

División celular

ADN

Introducción 

Es un método por el cual se obtiene el ADN a partir de las células y puede provenir de un cepillado bucal,vaginal, cervical, de fluidos como la saliva, la sangre o casi cualquier parte de un organismo. La extracción consiste en separar el ADN de otros componentes celulares (como la membrana o las proteínas) con el fin de poder estudiarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se utiliza para analizar a pacientes con diferentes padecimientos como enfermedades genéticas, cáncer, infecciones, etc.

 

Reactivos y Materiales

  • Material biológico: células en cultivo, tejido de biopsias, órganos o fluidos corporales.
  • Proteinasa K: es una enzima que sirve para romper/degradar a las proteínas que están unidas al ADN.
  • Centrífuga: equipo que ayuda a separar los diferentes componentes de una muestra por medio de una fuerza giratoria.
  • Fenol: es un disolventes orgánicos que sirven para separar las proteínas celulares del ADN
  • Etanol: es un disolvente que no se mezcla con el ADN por lo tanto se usa para precipitar el ADN
  • RNAsa: proteína (enzima) que rompe el ARN.
  • Espectrofotómetro: equipo que sirve para medir la cantidad de  ADN  o ARN.

Procedimiento

  1. Se debe lisar o romper nuestras células para extraer el ADN y todos los componentes celulares libres.
  2. Se debe degradar las proteínas principalmente las unidas al ADN y las del citoplasma usando proteasa K.
  3. Después se separan los diferentes componentes celulares del ADN con disolventes orgánicos
  4. Posteriormente se debe  precipitar con etanol  y/o  centrifugación .
  5. Como el etanol precipita también al ARN (por que son polimeros muy similares) se debe colocar una RNAsa, el cual rompe el ARN con el fin de dejar solo ADN
  6. Se inactiva la enzima de ARN con calor y despues se resuspende el ADN en agua ultra pura con el fin de manipularlo mejor Por ultimo seCuantificación de ADN: se mide la concentración del ADN usando un equipo llamado espectrofotómetro para conocer la cantidad de ADN total de nuestro material biológico.

Resultado

Fragmentos de  ADN provenientes de  células.

Fuentes de error más frecuentes

Todos los materiales y reactivos que se usan para la extracción deben estar limpios y esterilizados.

Aplicaciones

Técnicas biotecnológicas

Secuenciación

PCR

Genotipificación

Temas relacionados

PCR

QPCR o PCR en tiempo real

Genética

Genómica

Notas

Para realizar experimentos posteriores es necesario evaluar la calidad del ADN realizando un gel de electroforesis.

Referencias:

U.S. National Library of Medicine. (2016). What is DNA? de NIH Sitio web: https://ghr.nlm.nih.gov/primer/basics/dna Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walters, P. (2002) Molecular Biology of the Cell (4a ed.). Nueva York, Londres: Garland Science
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Cómo citar: Checa Rojas, A. (2017, 25 de Mayo ) Extracción de ADN. Conogasi, Conocimiento para la vida. Fecha de consulta: Diciembre 15, 2018

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