Conocimientos previos
Célula [1]
División celular [2]
ADN [3]
Introducción
Es un método por el cual se obtiene el ADN a partir de las células y puede provenir de un cepillado bucal,vaginal, cervical, de fluidos como la saliva, la sangre o casi cualquier parte de un organismo [4]. La extracción consiste en separar el ADN de otros componentes celulares (como la membrana o las proteínas [5]) con el fin de poder estudiarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se utiliza para analizar a pacientes con diferentes padecimientos como enfermedades genéticas, cáncer, infecciones, etc.
Reactivos y Materiales
- Material biológico: células en cultivo, tejido de biopsias, órganos o fluidos corporales.
- Proteinasa K: es una enzima [6]que sirve para romper/degradar a las proteínas [7]que están unidas al ADN.
- Centrífuga: equipo que ayuda a separar los diferentes componentes de una muestra por medio de una fuerza giratoria.
- Fenol: es un disolventes orgánicos que sirven para separar las proteínas celulares del ADN
- Etanol: es un disolvente que no se mezcla con el ADN por lo tanto se usa para precipitar el ADN
- RNAsa: proteína (enzima) que rompe el ARN.
- Espectrofotómetro: equipo que sirve para medir la cantidad de ADN o ARN [8].
Procedimiento
- Se debe lisar o romper nuestras células para extraer el ADN y todos los componentes celulares libres.
- Se debe degradar las proteínas principalmente las unidas al ADN y las del citoplasma [9] usando proteasa K.
- Después se separan los diferentes componentes celulares del ADN con disolventes orgánicos
- Posteriormente se debe precipitar con etanol y/o centrifugación .
- Como el etanol precipita también al ARN (por que son polimeros muy similares) se debe colocar una RNAsa, el cual rompe el ARN con el fin de dejar solo ADN
- Se inactiva la enzima de ARN con calor y despues se resuspende el ADN en agua ultra pura con el fin de manipularlo mejor Por ultimo seCuantificación de ADN: se mide la concentración del ADN usando un equipo llamado espectrofotómetro para conocer la cantidad de ADN total de nuestro material biológico.
Resultado
Fragmentos de ADN provenientes de células.
Fuentes de error más frecuentes
Todos los materiales y reactivos que se usan para la extracción deben estar limpios y esterilizados.
Aplicaciones
Técnicas biotecnológicas
Secuenciación
PCR
Genotipificación
Temas relacionados
PCR
QPCR o PCR en tiempo real
Genética
Genómica
Notas
Para realizar experimentos posteriores es necesario evaluar la calidad del ADN realizando un gel de electroforesis [10].