Descripción Los sitios de restricción se incorporan dentro de los primers 5' (directo) y 3' (inverso) cuando se amplifica un gen blanco mediante PCR. La elección del sitio de restricción en los primers es muy importante para que pueda ser incorporado en la posición correcta dentro de un plásmido. La clonación basada en PCR es versátil y permite que cualquier fragmento de ADN… leer más "Método: Diseño de primers con sitios de corte para clonación"
Descripción Durante la muerte celular las células adherentes en cultivo se desprenden del fondo de la placa de cultivo. Esta característica se puede usar para la cuantificación indirecta de la muerte celular y para determinar las diferencias en la proliferación tras la estimulación con agentes que inducen la muerte. Un método simple para detectar la adherencia mantenida de las células… leer más "Tinción de Cristal Violeta (0.5%) en cultivo de células adherentes"
Descripción Ficoll-Paque es un medio en gradiente de densidad comúnmente usado para aislar células mononucleares provenientes de sangre periférica humana, utilizando un procedimiento de centrifugación basado en el método desarrollado por Bøyum (Bøyum, A., Scand. J. 1968). La separación de las células de sangre periférica humana normal generalmente se obtienen: • 60 ± 20% de recuperación de las células mononucleares presentes… leer más "Método: aislamiento de células sanguíneas por gradiente de Ficoll-Paque"
Descripción La extracción de proteínas con fenol es un método alternativo a la extracción clásica de TCA-acetona. Permite la recuperación eficiente de proteínas y elimina los componentes no proteicos, polisacáridos, lípidos y compuestos fenólicos. Después de la extracción con fenol, las proteínas se precipitan con acetato de amonio en metanol. Esta extracción ha sido probado para electroforesis de una y dos dimensiones (1-DE… leer más "Extracción fenólica de proteínas"
Descripción La fuerza centrífuga relativa o fuerza g (RCF) es la cantidad de aceleración que se aplicará a la muestra. Depende de las revoluciones por minuto (rpm) y del radio del rotor. Es relativo a la fuerza de la gravedad de la Tierra. Un protocolo o método bien redactado deberá indicar que al momento de usar una centrífuga debe hacerlo usando fuerza g en lugar… leer más "Método: Conversión de las fuerzas g (RCF) a revoluciones por minuto (rpm) y Equilibrio del rotor"
Descripción La PCR o reacción en cadena de la polimerasa es una técnica muy importante en el campo de la biología molecular y biotecnología para realizar clonación y manipulación de secuencias de ADN existentes. En este método se describe paso a paso cómo construir rápidamente un gen sintético (sin requerir un ADN molde) mediante una PCR de dos pasos (Dillon P.J. & Rosen C.A., 1990). Este… leer más "Método: Rápida construcción de un gen sintético"
Descripción Los medios de cultivo son soluciones nutritivas utilizadas en laboratorios para cultivar microorganismos. El crecimiento y la supervivencia de los microorganismos dependen del entorno de crecimiento disponible y favorable. Para un cultivo exitoso, es necesario comprender sus requerimientos nutricionales y luego suministrar los nutrientes esenciales en la forma y proporción adecuadas en un medio de cultivo. La composición general de un… leer más "Método: Medios de cultivo sólidos agar o agarosa"
Descripción La transformación es una método por el cual un ADN ajeno se introduce en una célula generalmente bacteriana. La transformación de bacterias tiene una gran relevancia no solo en el campo de la microbiología, sino también como técnica de almacenamiento y replicación de secuencias de ADN o plásmidos. Por lo general, la mayoría de los plásmidos (incluso los diseñados para células de… leer más "Método: Células competentes y transformación"
El ARN mensajero o ARNm es el ácido ribonucleico de una sola cadena que transfiere la información contenida en el ADN a proteínas. Antes de que el ARNm esté en funcionamiento y produzca dichas proteínas, se lleva a cabo modificaciones en la molécula como: "Splicing” Agregado del “cap” Poliadenilación Modificación de los nucleótidos Edición La diversidad del procesamiento del ARNm ayuda a… leer más "Procesamiento del ARNm o maduración del ARN"
Biodiversidad Todos los organismos vivos que existen forman parte de la biodiversidad de la Tierra y son el resultado de 4 mil millones de años de evolución (Bell, E. A 2015). Estos organismos interactúan entre sí, como una inmensa red entretejida formando interacciones entre las diferentes especies y sus hábitats, dando lugar a un sin número de adaptaciones. Así, muchos organismos… leer más "¿Por qué los gastrónomos también deben cuidar la biodiversidad?"
Descripción La electroforesis de proteínas de dos dimensiones es una técnica que ha precedido el nacimiento de la proteómica. Y si bien, no es el único esquema utilizado en la proteómica actual, aún es utilizada por sus características y diversas ventajas. Al comienzo de los años 70, la separación proteica de alto rendimiento se realizaba mediante técnicas electroforéticas en presencia… leer más "Método: Gel de poliacrilamida de dos dimensiones 2D-PAGE"
La reacción con la enzima ligasa cataliza la unión de dos moléculas deseadas de ADN (inserto y vector) en un plásmido generalmente a partir de la formación de enlaces covalentes. Los plásmido son vectores de clonación útiles porque son fáciles de duplicarse en un alto número de copias en las células bacterianas, además de que son faciles de aislar y purificar. Los… leer más "Método: ligamiento con T4 ADN ligasa"
Descripción Antelmann y colaboradores acuñaron el término de “secretoma”, y se define como un subgrupo del proteoma que activamente se secreta fuera de la célula, por lo cual, obtiene su nombre. El secretoma de las células y de los tejidos puede reflejar una amplia variedad de condiciones patológicas y representa una fuente muy rica para la búsqueda de biomarcadores. Las… leer más "Método: Secretoma de líneas celulares"
El Verseno es una disolución de ácido etilen-diamino-tetra-acético (EDTA) para el uso de la disociación no enzimatica de células adherentes en cultivo. Para preparar un litro de solución de verseno, pH a 7.5 el pH se ajusta con HCL 10N (se esteriliza a 120 lb de presión, durante 20 min), se disuelven en 800 mL de agua bidestilada y se… leer más "Método: Verseno"
Esta solución se ocupa para mantener a las células en condiciones fisiológicas estables durante periodos cortos, así como la preparación de tratamientos, administración agentes xenobióticos o la inoculación de células cancerígenes en ratones. NOTA: La capacidad amortiguadora es proporcionada por las sales de fosfato. La preparación es la siguiente: Se disuelve en 800mL de agua ultra pura Después se mezcla… leer más "Método: Disolución amortiguadora de fosfatos (PBS)"
Introducción La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica sensible y muy útil para obtener y generar muchas copias de secuencias específicas de ADN de una muestra compleja de ADN con una diversidad y abundancia diferencial de secuencias; a este proceso se le conoce como: amplificación del ADN. Para llevar a cabo este proceso, se requiere de… leer más "Método: PCR"
Introducción Una preparación adecuada de una muestra de proteína, es requerida antes de un análisis de espectrometría de masas (MS por sus siglas en ingles), métodos de separación o enriquecimiento de proteínas mediante geles de poliacrilamida de una o dos dimensiones (1D o 2D SDS-PAGE respectivamente), cromatografía líquida o captura de afinidad. Posteriormente, se deben digerir las proteínas en péptidos, comunmente… leer más "Método: extracción de proteínas en gel para la identificación por espectrometría de masas (MALDI o LC-MS/MS)"
Introducción La transferencia de proteínas o western blot es una técnica muy usada en áreas de biología celular, bioquímica y biología molecular. La técnica usa tres pasos para llevarla a cabo: La separación de proteínas por peso molecular en geles de poliacrilamida La transferencia a una membrana o soporte sólido, que permite su manipulación El marcaje de la proteína blanco… leer más "Método: Western blot (transferencia semi-seca)"
Descripción La electroforesis es un método de separación de biomoléculas como el ADN o ARN de acuerdo a su tamaño, permitiendo además su aislamiento cortando la zona de interés. La electroforesis en ácidos nucleicos es muy versátil, porque permite una observación directa de cada fragmentos separado directamente en el gel, ya que, su tinción mediante un compuesto llamado bromuro de… leer más "Método: Gel de electroforesis Agarosa"
Introducción Las endonucleasas o enzimas de restricción son proteínas de origen bacteriano que reconocen y cortan secuencias específicas de ADN de doble cadena. Estas enzimas se pueden clasificar en tres grupos del I al III. Las enzimas tipos I y III tienen la capacidad de metilar y cortar el ADN, mientras que las del tipo II solo cortan el ADN.… leer más "Método: Digestión por enzimas de restricción"
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