Método: Disolución amortiguadora de fosfatos (PBS)

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Esta solución se ocupa para mantener a las células en condiciones fisiológicas estables durante periodos cortos, así como la preparación…

Esta solución se ocupa para mantener a las células en condiciones fisiológicas estables durante periodos cortos, así como la preparación de tratamientos, administración agentes xenobióticos o la inoculación de células cancerígenes en ratones. NOTA: La capacidad amortiguadora es proporcionada por las sales de fosfato.

La preparación es la siguiente:

  1. Se disuelve en 800mL de agua ultra pura
  2. Después se mezcla en agitación constante en una placa de agitación
  3. Se ajusta el pH  a 7.5 utilizando una disolución de HCl 8N
  4. Se afora a un volumen final de 1000 mL
  5. Posteriormente se esteriliza en autoclave por 20 min a 15 psi y 120°C o por filtración con una membrana de 0.22 μm.
  6. Y se almacena a 4°C hasta su uso

 

Reactivo Concentración 1X 1X Concentración 10X 10X
Cloruro de Sodio NaCl 137 mM    8 g 1.37 M   80 g
Cloruro de potasio, KCl  2.7 mM  0.2 g 27 mM    2 g
Fosfato de sodio monobásico, Na2HPO4 10 mM  1.44 g 100 mM 14.4 g
Fosfato de potasio dibásico, KH2PO4  1.8 mM  0.24 g 18 mM  2.4 g
De ser necesario, el PBS puede suplementarse con :
CaCl2•2H2O 1 mM 0.133 g 10 mM 1.33 g
MgCl2•6H2O  0.5 mM  0.10 g 5 mM  1.0 g

NOTA: para uso en cultivo celular es recomendable usarlo con cloruro de calcio y magnesio, ya que se evita que las células adherentes se desprendan de la superficie. 

Referencias:

CSH. 2006. Phosphate-buffered saline (PBS). http://cshprotocols.cshlp.org/content/2006/1/pdb.rec8247
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Cómo citar: Checa Rojas, A. (2017, 24 de Noviembre ) Método: Disolución amortiguadora de fosfatos (PBS). Conogasi, Conocimiento para la vida. Fecha de consulta: Octubre 15, 2018

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