Extracción de ADN

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Conocimientos previos Célula División celular ADN Descripción Se le llama extracción al método por el cual se obtiene el  ADN  a…

Conocimientos previos

Célula
División celular
ADN

Descripción

Se le llama extracción al método por el cual se obtiene el  ADN  a partir de material biológico (ej.: cepillado bucal, saliva , sangre o cualquier tejido) utilizando técnicas físicas y químicas. La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se utiliza para analizar y diagnosticar a pacientes con enfermedades neurodegenerativas, cáncer, infecciones, etc.

Material

Material biológico: organismos (bacterias, hongos, protozoarios, etc.), células, tejidos, organos.

Guantes de nitrilo/latex: ayuda a proteger la degradación de la muestra y protegernos de contaminación en caso de muestras biológico infecciosas

Proteasas: sirven para la degradación de proteínas 
Centrífuga: equipo que ayuda a acelerar el proceso de separación de componentes de diferentes densidades por medio de una fuerza giratoria.
RNAsa: enzima que degrada ARN.

Espectrofotómetro: equipo que sirve para medir la concentración de sustancias como ácidos nucleicos entre otras moléculas.

Pasas generales en un laboratorio 

  1. Obtención de la muestra celular
  2. Lisis celular: es el proceso físico o químico por el cual se rompen las membranas para liberar sus componentes celulares.
  3. Degradación de proteínas: se rompen las proteínas que cubren al  ADN  usando proteasas.
  4. Procesos de Separación: procesos físicos o químicos mediante los cuales se separan diferentes componentes celulares como lípidos, proteínas, ARN, ADN y moléculas pequeñas. Para esto se usa una centrífuga.
  5. Degradación de ARN por RNAsa: proceso que rompe específicamente cadenas ARN remanente con el fin de evitar contaminación de este material.
  6. Cuantificación de ADN: técnica mediante la cual se mide la concentración del material genético usando un espectrofotómetro.

 

Procedimiento para una extracción casera:

Material

  1. 1 bolsa de plástico con cierre (tamaño para sándwich)
  2. 1 fresas grande o 2 pequeñas (frescas o congeladas)
  3. 2 cucharaditas de detergente para platos
  4. 1 cucharadita de sal
  5. ½ taza de agua
  6. 2 vasos chicos
  7. 1 filtro de café
  8. 1L de Alcohol 96% o alcohol del 96°
  9. 1 palo de paleta de madera o agitador de café de plástico

Procedimiento

  1. Coloca una fresa grande o dos pequeñas y retirale las hojas verdes que puedan quedar en la fruta.
  2. Colocalas en la bolsa de plástico, retire el aire y séllela para que puedas romperalas suavemente las fresas dentro de la bolsa durante unos dos minutos. Triturar completamente las fresas.
  3. Buffer de extracción de ADN: En un vaso mezcle 2 cucharaditas de detergente, 1 cucharadita de sal y ½ taza de agua.
  4. Agregue 2 cucharaditas del líquido buffer de extracción a la bolsa con las fresas trituradas.
  5. Vuelva a sellar la bolsa y aplaste suavemente durante 1 min. NOTA: Evite hacer muchas burbujas.
  6. Coloque el filtro de café dentro del otro vaso
  7. Abra la bolsa y vierta el líquido de fresa en el filtro. Puede exprimir suavemente hasta obtener el líquido restante.
  8. Luego, vierta por las paredes del vaso el alcohol frío con una cantidad igual al del líquido con fresa . NOTA: No mezcle ni revuelva, solo deja que la mezcla repose por unos segundos.
  9. En unos segundos, observe el desarrollo de una sustancia turbia blanca (ADN) en la capa superior sobre la capa de extracto de fresa.
  10. Incline el vaso y recoja el ADN con un palo de madera.
  11. Separe el ADN del resto del material contenido en las células de la fresa

Resultado

Fragmentos de ADN provenientes de nuestro material biológico. Para más detalles ver:

StrawberryExtractionInstructions

Fuentes de error más frecuentes en el laboratorio

Cuando se trabaja en laboratorio todos los materiales y reactivos que se usan para la extracción deberán estar limpios y esterilizados. Además, deben estar libres de nucleasas, con el fin de evitar la degradación de ADN.

Métodos relacionados

qPCR o PCR en tiempo real

Aplicaciones biotecnológicas

Secuenciación 

Genotipificación 

Temas relacionados

PCR

Genética

Genómica

 

Referencias:

U.S. National Library of Medicine. (2016). What is DNA? de NIH Sitio web: https://ghr.nlm.nih.gov/primer/basics/dna Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walters, P. (2002) Molecular Biology of the Cell (4a ed.). Nueva York, Londres: Garland Science.
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Cómo citar: Checa Rojas, A. (2016, 22 de Junio ) Extracción de ADN. Conogasi, Conocimiento para la vida. Fecha de consulta: Septiembre 23, 2020

Esta obra está disponible bajo una licencia de Creative Commons Reconocimiento-No Comercial Compartir Igual 4.0

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4 Comentarios en "Extracción de ADN"

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Antonio

Recomiendo que sea mas tipo secundaria o de enseñanda;para la pagina

benjamin valdes

gracias por dar el formato apa listo

Romero

Para cualquiera de 9.ª : VAGOOOS

Romero

Para cualquiera de 9.ª VAGOOOOOOS

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