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Electroforesis en gel

Conocimientos previos
Descripción

La electroforesis es un método por el cual se separan  moléculas por tamaño o peso molecular usando una corriente  eléctrica. La separación se realiza comúnmente en un  gel  que funciona como filtro y está constituido habitualmente de materiales como agarosa o poliacrilamida. Su principal uso es la separación de mezclas de macromoléculas, especialmente de ácidos nucleicos (ADN [1] o ARN) o proteínas. Los ácidos nucleicos disponen de una carga eléctrica negativa y cuando son  separados en el  gel se dirigirán al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan artificialmente con una sustancia llamada dodecilsulfato de sodio (SDS) que se incorpora a estas y les da una carga negativa. Al colocar una muestra de proteínas dentro del gel y al pasar una corriente eléctrica, éstas se moverán a través del gel dirigiéndose al polo positivo. Las  moléculas más pequeñas se moverán más rápidamente y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida en el gel .

Debido a estas cualidades, en la investigación biomédica sus usos son muy diversos, desde analizar la calidad de los ácidos nucleicos y proteínas, conocer el tamaño o peso molecular de estas  moléculas, como proceso previo a la purificación para la secuenciación o como un paso previo a otros métodos de biología molecular, como la identificación secuencias específicas de genes o proteínas (ver método western blot) de  muestras de  pacientes para el análisis de  enfermedades, ancestría, reconocimiento de  cadáveres, etc.

Entrada/Muestra

Muestra: es una mezcla del mismo tipo de componentes proveniente de una extracción de ácidos nucleicos (ADN, ARN) o de proteínas.

Recursos/Material
Requisitos previos
Procedimiento

 

Salida/Resultado

Un gel  con una mezcla de ADN, ARN o proteínas separadas. Las moléculas separadas lucen como múltiples bandas, distribuidas como ‘escalones’ a lo largo del gel.

Fuentes de error más frecuentes
Aplicaciones
Temas relacionados
Notas

Todos los materiales y reactivos que se usan deberán estar químicamente limpios y estériles.  Además, deben estar libres de nucleasas (enzimas que degradan ADN o ARN) o proteasas (enzimas que degradan proteínas) con el fin de evitar daño a la muestra. Las muestras separadas y embebidas en el gel pueden observarse a simple vista en el caso de una tinción colorida (en proteínas, ver Método tinción Coomassie), pero en el caso de ácidos nucleicos o tinciones fluorescentes es necesario observar el gel con un escáner especial (ver Métodos de tinción Fluorescente para ácidos nucleicos o Métodos de tinción Fluorescentes para proteínas).